| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 784-1 | ||||
Resumo:Os anticorpos monoclonais são específicos e eficazes no desenvolvimento de terapias e diagnósticos. O Infliximabe é um anticorpo monoclonal quimérico que se liga especificamente e bloqueia o TNF-α (Fator de Necrose Tumoral alfa). É um medicamento biológico utilizado no tratamento de doenças autoimunes e inflamações crônicas, como artrite psoriásica e doença de Crohn. As bactérias são sistemas tradicionais, bem-sucedidos e frequentemente utilizados para expressar fragmentos de anticorpos. Entretanto, para a produção de anticorpos monoclonais completos, a plataforma tradicionalmente utilizada é a cultura de células de mamíferos. Além destas plataformas, as microalgas são atraentes como sistemas alternativos para a expressão de proteínas recombinantes complexas. Entre as microalgas, Chlamydomonas reinhardtii é a mais estudada atualmente como plataforma de produção de proteínas recombinantes. Este trabalho tem como objetivo comparar a viabilidade do núcleo e do cloroplasto de Chlamydomonas reinhardtii para a expressão de Infliximabe. A transformação genética do núcleo e do cloroplasto foi realizada utilizando a técnica de pérolas de vidro. Para seleção das cepas recombinantes do núcleo, foi utilizada a proteína fluorescente mCherry como um sistema repórter em vetor contendo peptídeo sinal para a secreção de proteínas. A fluorescência da proteína foi medida no sobrenadante e em toda a cultura celular utilizando um leitor de microplacas. Os resultados de fluorescência foram superiores em comparação a estudos anteriores, entretanto, não foi possível detectar a proteína recombinante utilizando a técnica de Western Blotting. Por outro lado, foi possível obter cepas recombinantes através da transformação do cloroplasto. A confirmação de gene positivo para Infliximabe e a detecção da proteína recombinante foram realizadas, respectivamente, por PCR e Western Blotting. De acordo com os resultados obtidos o sistema de expressão do cloroplasto de C. reinhardtii pode ser usado como sistema alternativo de baixo custo para produção de anticorpo monoclonal. Palavras-chave: Chlamydomonas reinhardtii, anticorpo monoclonal, Infliximabe, transformação genética, microalga Agência de fomento:FAPESP, UFABC, CAPES | |||||